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转As6G-FFT基因烟草的阳性鉴定及基因拷贝数测定

文献类型： 中文期刊

作者： 铁原毓 1 ; 文军琴 1 ; 田洁 1 ;

作者机构： 1.青海大学农林科学院/青海省蔬菜遗传与生理重点实验室

关键词： As6G-FFT基因;转基因烟草;阳性鉴定;拷贝数

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2022 年 37 卷 005 期

页码： 592-599

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的] 为验证转As6G-FFT烟草的基因功能,筛选稳定遗传的阳性株系材料,以建立基于SYBR Green的实时荧光定量PCR的转基因拷贝数检测方法.[方法] 利用PCR检测、实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术及生理指标分析鉴定转As6G-FFT基因阳性烟草植株,并利用基于SYBR Green的实时荧光定量PCR鉴定阳性转基因烟草中As6G-FFT基因的拷贝数.[结果] (1)基于PCR检测,14个转基因烟草叶片均能扩增出目的片段,表明14个株系中均已成功转入目的基因As6G-FFT;(2)14个转基因株系中As6G-FFT基因表达量呈极显著(P<0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中6个株系的表达量呈极其显著升高(P <0.001);且其表达量与野生型相比最高提高215.13倍;(3)基于生理指标,测定转As6G-FFT基因烟草的果聚糖含量,发现14个转基因株系中果聚糖含量呈极显著(P <0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中13个株系的果聚糖含量极其显著升高(P <0.001);且其果聚糖含量与野生型相比最高提高10.47倍;(4)基于SYBR Green实时荧光定量PCR构建As6G-FFT和NtACT基因的标准曲线,分别为y=?0.2907x+3.0145和y=?0.2813x+8.0141,R2均为1;在检测的14个转基因株系中As6G-FFT基因拷贝数为1~3,其中1、2和3拷贝的单株数分别占总数的35.7%、50.0%和14.3%.[结论] 本研究从DNA、RNA和生理水平综合进行阳性转基因烟草的鉴定,鉴定结果更为准确.此外,还建立了基于SYBR Green实时荧光定量PCR的转基因烟草中外源As6G-FFT基因拷贝数检测方法,可用于快速、高效地估算转基因烟草中外源基因拷贝数,为后续获得稳定遗传材料提供筛选依据.

  • 相关文献

[1]马铃薯T-DNA插入拷贝数的检测及对农艺性状的影响研究. 石建斌,杨永智,王舰. 2015

[2]StSWEET16b基因在烟草中异源表达对果糖含量和晚疫病抗性的影响. 范希德,贺苗苗,叶广继,王舰,周云. 2021

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