文献类型： 中文期刊

作者： 李永权 ¹ ; 刘淼 ¹ ; 上官黎阳 ¹ ; 王晓红 ² ; 胡涛 ¹ ; 唐柳 ¹ ; 张明生 ¹ ;

作者机构： 1.贵州大学生命科学学院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室

2.贵州省农业科学院蚕业研究所

关键词： 钩藤;马钱苷酸甲基转移酶;基因克隆;启动子克隆;酵母单杂交

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2024 年 52 卷 002 期

页码： 145-154

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础.[方法]基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系.[结果]克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1 137 bp,共编码378个氨基酸.UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近.UrLAMT启动子序列长度为1 141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用.[结论]获得了 UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导.