文献类型： 中文期刊

作者： 李旭锋 ¹ ; 王垚 ¹ ; 金前跃 ¹ ; 周稳 ¹ ; 柴永笑 ¹ ; 陈晓 ¹ ; 丁培阳 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心;西北农林科技大学动物医学院

关键词： 新城疫病毒;HN蛋白;毕赤酵母;蛋白质纯化;蛋白质活性

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2020 年 03 期

页码： 145-150

收录情况： 北大核心

摘要： 为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度。结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5%甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90%的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰。综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰。