文献类型： 中文期刊

作者： 孙俊颖 ¹ ; 伍绮文 ² ; 李吉初 ² ; 李春红 ² ; 郭鹏举 ² ; 黄艺 ³ ; 尹飞飞 ³ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站

2.广州维佰生物科技股份有限公司

3.海南医学院基础医学与生命科学学院

关键词： 虫媒病毒;流行性乙型脑炎病毒;西尼罗病毒;黄热病毒;寨卡病毒;液相芯片;Luminex xTAG技术

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2024 年 51 卷 010 期

页码： 78-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】黄病毒科虫媒病毒引起的人畜共患传染病对我国畜牧业及公共卫生造成严重影响。虫媒病毒种类多且感染症状相似，临床监测工作繁重，建立4种危害严重的黄病毒科虫媒病毒快速、高通量检测技术为其诊断和流行病学监测提供技术支撑。【方法】利用Luminex xTAG技术，针对流行性乙型脑炎病毒（JEV）5'UTR、西尼罗病毒（WNV）5'UTR及部分C基因、黄热病毒（YFV）5'UTR和寨卡病毒（ZIKV）NS5基因保守区，设计4对特异性引物并对引物进行TAG和Biotin修饰，以标准毒株为模板，进行多重PCR扩增；将扩增产物与带有反向TAG序列的不同编号荧光MagTAG磁珠、链霉亲和素R-藻红蛋白进行核酸杂交反应，利用Luminex 200系统检测磁珠荧光信号和藻红蛋白荧光信号，对病原进行分类和定量检测。【结果】建立了能特异性检测JEV、WNV、YFV和ZIKV的四重Luminex xTAG方法，其最优引物工作浓度为0.5、0.5、0.75、0.5 μmol/L；杂交工作体系为磁珠工作液20 μL、PCR扩增产物5 μL、SAPE报告缓冲液75 μL；杂交温度为37℃，杂交时间为30 min，pH值为8.0；该检测方法特异性好且不与登革病毒等其他虫媒病毒发生交叉反应。重复性试验结果表明，Luminex xTAG方法的批内变异系数为2.50%～5.63%，批间变异系数为3.61%～12.50%。四重Luminex xTAG方法对JEV和ZIKV的检测限为1×10～4 copies/μL，对WNV和YFV的检测限为1×10³ copies/μL，其检测WNV、YFV和ZIKV的灵敏度较常规PCR高10～100倍。用Luminex xTAG方法和RT-qPCR方法检测209份临床样品和模拟样品，JEV、WNV、YFV、ZIKV符合率为100%。【结论】建立的四重Luminex xTAG方法具有高通量、高特异性和灵敏度、成本效益高的优点，可为虫媒病毒临床诊断和流行病学监测提供一种高通量技术手段。