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猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 李文良 1 ; 毛立 2 ; 张纹纹 2 ; 杨蕾蕾 2 ; 王小敏 2 ; 江杰元 2 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

2.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪瘟病毒;E2蛋白;糖基化;杆状病毒表达系统

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 02 期

页码： 341-345

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2。在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2。Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白。这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。

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