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猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 李鸽 1 ; 刘肖 1 ; 李青梅 2 ; 杨艳艳 2 ; 王彦红 2 ; 张改平 3 ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院

2.河南省农业科学院

3.河南农业大学 牧医工程学院

关键词： 猪流感病毒;免疫过氧化物酶单层细胞试验;NP蛋白;单克隆抗体

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2019 年 48 卷 08 期

页码： 129-133

收录情况： 北大核心

摘要： 为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10~(-6)、1×10~(-6)和1×10~(-5)。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Western blot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。

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