文献类型： 中文期刊

作者： 王传红 ¹ ; 宋旭 ² ; 刘诗雨 ² ; 张格格 ² ; 徐红 ² ; 王祎 ² ; 赵永祥 ² ; 郭荣利 ² ; 范宝超 ² ; 胡朝阳 ¹ ; 李彬 ² ;

作者机构： 1.江苏大学生命科学学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪流行性腹泻病毒;S蛋白;信号肽;稳定表达;亚单位疫苗

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 873-880

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了优化在真核细胞中猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白的分泌表达，且构建稳定表达的细胞系，本研究设计合成了9个信号肽引物，通过同源重组的方式得到表达PEDV变异株AH2012/12株S全长蛋白的9个重组表达质粒，瞬时转染HEK 293T细胞后，通过Western-blot验证蛋白外分泌表达水平，结果显示，筛选出的含跨膜蛋白酶丝氨酸信号肽的S蛋白具有较好的外分泌表达特性；利用G418筛选，获得稳定表达PEDV S蛋白的单克隆细胞，通过传代验证不同代次的蛋白表达水平，成功构建了可稳定外分泌表达PEDV S的CHO细胞系。结果显示，可在100 m L CHO-PEDV/S细胞培养上清中获得约5 mg的PEDV S蛋白，提高了PEDV S蛋白的表达和分泌，为进一步研制PEDV亚单位疫苗奠定了基础。