文献类型： 中文期刊

作者： 宋艳华 ¹ ; 李珊珊 ¹ ; 王芳 ¹ ; 胡波 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 魏后军 ¹ ; 薛家宾 ¹ ; 徐为中 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 兔出血症病毒VP60;重叠延伸PCR;嵌合蛋白;血凝特性;HBGA受体结合

期刊名称： 南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2016 年 39 卷 02 期

页码： 297-304

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]从病毒样颗粒(VLP)的形成、血凝特性以及受体组织血型抗原(HBGA)结合特性方面,分析VP60 loop区在兔出血症病毒(RHDV)VLP功能中的作用。[方法]针对RHDV VP60蛋白的loop区411~417位氨基酸对应的基因设计引物,通过SOE法将411~417位氨基酸等量替换成柔性氨基酸GSGGSGG,获得重组基因VP60-411-417,利用杆状病毒表达系统获得重组病毒r Ac-VP60-411-417。将重组病毒接种Sf9细胞,通过IFA、SDS-PAGE和Western blot等方法证明嵌合蛋白P411-417的表达。通过负染透射电镜观察嵌合蛋白VLP的形成,利用血凝试验分析嵌合蛋白的血凝特性,利用合成多糖结合试验分析嵌合蛋白的受体结合特性。[结果]Western blot、IFA和负染透射电镜试验结果显示,嵌合蛋白P411-417得到有效表达,且能够形成完整的VLP;合成多糖结合试验结果显示,嵌合蛋白能够特异性结合HBGA,但其血凝特性消失。[结论]411~417位氨基酸的突变显著影响RHDV的血凝特性,不影响VLP的形成以及结合HBGA的能力,说明该区域是血凝特性的相关位点,但不是HBGA受体结合的关键位点。