文献类型： 中文期刊

作者： 汪浩 ¹ ; 乔绪稳 ² ; 陈瑾 ² ; 李图帅 ² ; 张元鹏 ² ; 侯继波 ² ; 郑其升 ² ; 孙卫东 ³ ;

作者机构： 1.国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学动物医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

2.;国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学动物医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

3.;国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学动物医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;

关键词： GEM技术;口蹄疫病毒;抗原纯化

期刊名称： 南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 147-153

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。[结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。[结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。