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感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

文献类型： 中文期刊

作者： 张雨良 1 ; 张树珍 1 ; 王健华 1 ; 熊国如 1 ; 王俊刚 1 ; 余乃通 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

关键词： 高粱花叶病毒;甘蔗;酵母双杂交文库;构建

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2012 年 33 卷 06 期

页码： 1096-1100

收录情况： CSCD

摘要： 为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,利用SMART技术成功构建了感染高粱花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验。采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA。经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上,成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。经检测构建的文库容量为1.6×106cfu,文库滴度2.2×106cfu/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700～2 000 bp,文库重组率约为96%。结果表明,该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础。

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