文献类型： 中文期刊

作者： 赵啸 ¹ ; 乔松林 ² ; 孙亚宁 ² ; 钱祁昇 ² ; 李睿 ² ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物医学院

2.河南省农业科学院动物疫病防控研究所/动物免疫学重点实验室

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;核衣壳蛋白;二聚体;间接ELISA;临床检测

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2024 年 53 卷 011 期

页码： 135-146

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein,N），设计表达二聚体N蛋白（N-dimer），并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）抗体间接酶联免疫吸附试验（Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA）检测方法。首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列，通过（GGGGS）3linker将N蛋白基因序列串联，经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体。利用原核表达系统进行诱导表达，并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化。Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性；冻融法比较N-dimer与单体N蛋白（N-monomer）的沉淀析出情况；ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性。以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法，对该方法的反应条件进行优化，验证其特异性、敏感性、重复性，并应用于临床血清样品检测。结果表明，在16℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达。Western-blot结果表明，N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应；相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存，并且免疫反应性更佳。成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法，且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性；与商业试剂盒结果进行比较，其阳性符合率为96.88%，总符合率为96.86%，符合率高。综上，成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer，并基于N-dimer建立了PRRSV抗体iELISA检测方法。