文献类型： 中文期刊
作者： 冯建海 1 ; 张玮 2 ; 李兴红 2 ; 燕继晔 2 ; 黄金光 1 ;
作者机构： 1.青岛农业大学农学与植物保护学院
2.北京市农林科学院植物保护环境保护研究所
关键词： 甘蓝枯萎病菌;REMI;转化子库
期刊名称： 植物保护
ISSN： 0529-1542
年卷期： 2013 年 39 卷 03 期
页码： 108-111，115
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 建立高效、稳定的甘蓝枯萎病菌REMI转化体系,为进一步获得特定表型突变体及基因功能研究建立技术储备。利用REMI(restriction enzyme mediate intergration)转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因的pUCAT-PH质粒转化甘蓝枯萎病菌A6菌株的原生质体,摸索获得转化子最适的潮霉素筛选浓度以及不同限制性内切酶和酶量对转化效率的影响;利用PCR(polymerase chain reaction)技术对潮霉素抗性转化子进行验证。结果表明转化子的最适潮霉素筛选浓度为50μg/mL;转化效率较高的限制性内切酶为HindⅢ,并且转化效率最高时的酶量为20U。利用该转化体系构建了含1 050个转化子的甘蓝枯萎病菌转化子库,对转化子进行Southern验证,证明该转化体系是可行的。
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