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小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 樊剑鸣 1 ; 张晓峰 2 ; 罗俊 1 ; 许君 3 ; 张巧 2 ; 张改平 1 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室

2.郑州大学公共卫生学院卫生毒理学研究室

3.河南农业大学生命科学院细胞生物学教研室

关键词： 酪氨酸酶基因;黑色素瘤细胞;毕赤酵母

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2008 年 24 卷 08 期

页码： 828-830

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115,表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析,采用Co2+离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性。结果:克隆了TYR基因。构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR。SDS-PAGE和Western blot分析显示,在相对分子质量(Mr)为约53000处出现1条特异性蛋白带,且能与兔抗TYR抗体发生反应。结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致,并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性。

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