文献类型： 中文期刊

作者： 徐春光 ¹ ; 杨立霞 ¹ ; 于宝莉 ² ; 李艳 ¹ ; 张月梅 ³ ;

作者机构： 1.呼伦贝尔学院农学院

2.呼伦贝尔市农牧科技推广中心

3.内蒙古自治区农牧业科学院

关键词： 绵羊肺炎支原体;黏附素P120;抗原表位;原核表达;反应原性;免疫原性

期刊名称： 现代牧业

ISSN： 2096-2975

年卷期： 2025 年 9 卷 002 期

页码： 24-32

摘要： 为了筛选用于研制绵羊传染性胸膜肺炎亚单位疫苗和血清学诊断的候选抗原，试验运用IEDB和ABCpred生物信息学软件，对绵羊肺炎支原体NM2010株P120的B细胞抗原表位进行预测分析。基于P120生物信息学预测结果，以p120优势抗原表位区编码基因为模板人工合成目的基因片段，并克隆到表达载体pET-28a（+）上进行原核表达。表达的重组蛋白进行Western-blot分析，并制作疫苗对兔进行免疫试验。用ELISA方法检测免疫兔血清特异性抗体IgG水平和IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ等细胞因子浓度。结果表明：绵羊肺炎支原体NM2010株P120蛋白第540～710位氨基酸区段属于优势抗原表位富集区。以第571～703位氨基酸序列的编码基因为模板，合成的基因序列完全正确，长度为414 bp,表达的P120_{571aa～703aa}重组蛋白相对分子质量为17.2 kDa。菌体超声破碎上清液和沉淀均可在SDS-PAGE凝胶上17.2 kDa处观察到目的条带，主要以包涵体形式存在。P120_{571aa～703aa}可与兔抗Mo NM2010株高免血清发生特异性反应，具有良好的反应原性。经4次免疫后，兔血清中产生了特异性抗体IgG,抗血清效价为1:128 000。与阴性对照组相比，重组蛋白免疫试验组的Th1/Th2类细胞因子含量均极显著升高（P<0.01）。结果表明，P120_{571aa～703aa}重组蛋白可以有效诱导试验动物产生体液免疫和细胞免疫反应，说明P120优势抗原表位区可以作为绵羊支原体性肺炎疫苗的候选蛋白。