文献类型： 中文期刊

作者： 肖丽 ¹ ; 赵淑庆 ² ; 袁雪松 ² ; 范丽原 ² ; 易鑫 ² ; 陈琢琦 ² ; 李彬 ² ; 李基棕 ² ; 主性 ¹ ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室

关键词： 293T细胞系;PDCoV;慢病毒;稳定表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 959-965

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV）S和RBD蛋白的293T细胞系，获得PDCoV S和RBD蛋白。本研究将优化合成的PDCoV S蛋白全长基因及其RBD的表达质粒进行双酶切鉴定，将重组质粒pLV-S-Puro、pLV-RBD-Puro、psPRX2、pMD2.G同时转染293T细胞中进行慢病毒包装，收集上清感染293T细胞，经嘌呤霉素初筛得到的多细胞克隆，进一步通过终点稀释法筛选获得稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的单克隆293T细胞系，通过Western blot检测蛋白表达，用纯化的PDCoV S和RBD蛋白分别免疫BALB/c小鼠，对重组蛋白进行免疫原性检测。结果表明，稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的293T细胞系构建成功，获得了重组慢病毒，纯化PDCoV S和RBD重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高的IgG抗体（S:1.2;RBD:0.9）,中和抗体水平分别达1∶128和1∶64。本研究构建的293T细胞系能稳定表达PDCoV S和RBD蛋白，为进一步研制PDCoV亚单位疫苗奠定了基础。