文献类型： 中文期刊

作者： 李天恩 ¹ ; 周思含 ¹ ; 孙洪超 ¹ ; 付媛 ¹ ; 石团员 ¹ ; 闫文朝 ¹ ;

作者机构： 1.河南科技大学动物科技学院;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;假定致密颗粒蛋白;原核表达;多克隆抗体;抗原性

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2024 年 36 卷 003 期

页码： 503-514

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确切报道.为发掘柔嫩艾美耳球虫GRAs并研究其功能,采用生物信息学、分子生物学、免疫学等技术从 E.tenella北京株中鉴定到 2 种假定致密颗粒蛋白(hypothetical dense granule protein,hEtGRA)hEtGRA12、hEtGRA9,并用纯化后的蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA、Western blot方法检测2 种蛋白的抗原性.分子克隆结果表明,hEtGRA12、hEtGRA9 基因编码区长度分别为1 188、1 110 bp,分别编码395、369 个氨基酸,与其他顶复合器门原虫致密颗粒蛋白GRA12、GRA9 物种间相似性分别为28.8%~39.6%、27.5%~29.5%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9 条带大小分别为63.6、67.0 ku;ELISA与Western blot结果表明,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9 均能诱导小鼠产生较高的抗体水平,且均可被鸡抗E.tenella阳性血清识别,表明具有较好的抗原性.该研究鉴定到 2 种球虫假定致密颗粒蛋白基因hEtGRA12、hEtGRA9,获得了重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9,为球虫致密颗粒蛋白基因功能和免疫应用研究奠定了基础.