文献类型： 中文期刊
作者： 王双双 1 ; 赵红梅 1 ; 周丹娜 2 ; 蔡行 1 ; 耿超 1 ;
作者机构： 1.长江大学动物科学学院
2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 日本乙型脑炎病毒;NS3基因;克隆;真核表达;转染;BHK21细胞;IFA;Western-blot
期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(上半月)
ISSN： 1004-7034
年卷期： 2019 年 009 期
页码： 90-92,96,185
收录情况： 北大核心
摘要： 为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体pEGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定.结果 表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%;BHK21细胞密度在70%~80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3;Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku;IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光.说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白.
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