文献类型： 中文期刊

作者： 王晶晶 ¹ ; 杨涵羽璐 ¹ ; 代蓉 ² ; 杨华 ² ; 石国庆 ² ; 杨永林 ² ; 万鹏程 ¹ ;

作者机构： 1.省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

2.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

关键词： 绵羊;高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP);启动子;双荧光素酶报告基因

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 010 期

页码： 2988-2997

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在构建高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)启动子荧光素酶报告基因载体并验证其活性,阐明HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤毛囊组织中的表达差异与羊毛经济性状的关系.运用PCR方法扩增HGTP基因启动子序列片段,克隆至pGL3-Basic载体中构建重组质粒,并通过双酶切验证和测定核酸序列鉴定;转染皮肤成纤维细胞并检测报告基因的活性;测定羊毛的纤维直径、长度的数据,利用实时荧光定量PCR分析HGTP基因在不同品种绵羊的皮肤毛囊组织中的表达情况.结果显示,萨福克羊与中国美利奴羊的羊毛纤维直径及自然长度差异极显著(P<0.01),HGTP基因表达水平与羊毛纤维直径存在极显著的高度正相关(P<0.01),与羊毛自然长度呈现显著的中等负相关(P<0.05),而羊毛直径与自然长度之间存在极显著的高度负相关(P<0.01).HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤组织中的表达水平差异极显著(P<0.01).启动子活性荧光素酶检测结果显示,KAP6.1、KAP7和KAP8.1启动子元件在绵羊皮肤成纤维细胞和3T3细胞中均有表达,且在绵羊成纤维细胞中的活性极显著高于在3T3细胞中的活性(P<0.01).HGTP基因可以作为研究羊毛纤维直径、自然长度的候选基因.构建不同长度的表达载体,转染皮肤成纤维细胞,获得的2个启动子元件都能驱动外源基因在体外细胞水平表达.绵羊HGTP基因启动子的功能研究为调控羊毛发育提供了理论依据.