文献类型： 中文期刊

作者： 足木热木·吐尔逊 ¹ ; 李晨宇 ¹ ; 陈明 ² ; 于月华 ³ ; 李晓荣 ¹ ; 杨洋 ¹ ; 王勇攀 ¹ ; 李波 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业科学院核技术生物技术研究所

2.新疆绿洲驼铃农业发展有限公司

3.新疆农业大学农学院

关键词： 陆地棉;GhUGP1基因;克隆;序列分析;原核表达

期刊名称： 西北农业学报

ISSN：

年卷期： 2024 年 011 期

页码： 2038-2047

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为进一步了解UGPase在棉花中的作用,根据全基因组测序结果,筛选且克隆了在陆地棉纤维发育过程中的关键基因GhUGP1.利用生物信息学方法对其核苷酸和氨基酸序列进行分析,通过同源重组技术,将GhUGP1基因的编码序列构建到原核表达载体pMAL-C4x上,通过IPTG诱导蛋白表达来确定IPTG诱导蛋白的最佳条件,最后利用Western Blot鉴定重组蛋白.结果显示,GhUGP1(XP_040931642.1)全长序列6572 bp,编码区1404 bp,编码467个氨基酸,预测分子质量约为51.493 ku,等电点为5.86.氨基酸序列比对分析发现在陆地棉、亚洲棉、木槿等不同物种间UGP序列的相似率为90.63%.进化树分析结果显示GhUGP1蛋白与亚洲棉UGP蛋白亲缘关系最近,同源性最高并在一个分支上.亚细胞定位结果显示该蛋白为核膜共定位.蛋白诱导时由于IPTG浓度梯度结果差别不明显,选择IPTG终浓度为0.3 mmol/L,而温度梯度和时间梯度结果差异明显,确定最佳诱导温度为28℃,最佳诱导时间为6 h,蛋白溶解及纯化的温度和时间为28℃诱导6 h.Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确,最终成功获得了大小为95.9 ku的pMAL-C4x-GhUGP1重组蛋白,为后期对GhUGP1功能深度解析提供帮助.