文献类型： 中文期刊
作者： 秦飞燕 1 ; 孙杰 1 ; 马凡舒 1 ; 王洋 1 ; 柏玲 1 ; 张蕾 1 ; 闫喜军 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室/农业部经济动物疫病重点实验室;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室
关键词： 阿留申病毒;VP2蛋白;表位基因;原核表达;CIEP;ELISA
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2019 年 39 卷 11 期
页码： 2135-2139+2151
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。
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