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猪APOBEC3F基因真核表达载体的构建及其在MARC145细胞中的表达定位

文献类型： 中文期刊

作者： 孟春花 1 ; 王春玲 1 ; 李静心 1 ; 李隐侠 1 ; 朱前明 1 ; 曹少先 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： APOBEC3F;真核表达载体;MARC145细胞;转染;荧光定量PCR;脂质体;猪

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2015 年 31 卷 06 期

页码： 1344-1349

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)属固有免疫系统中的重要成员,对人免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)等多种病毒的复制具有广泛的抑制作用。为构建APOBEC3F基因的真核表达载体,并检测其在体外培养的MARC145细胞中的表达情况,通过RT-PCR从猪脾脏组织扩增APOBEC3F基因,定向克隆到表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体p EGFP-CMV中,构建p EGFP-APOBEC3F。PCR扩增及测序显示,APOBEC3F插入载体位置、方向及序列均正确。p EGFP-APOBEC3F经脂质体介导法转染MARC145细胞,转染后24 h APOBEC3F m RNA的水平升至最高。细胞免疫化学法检测发现APOBEC3F蛋白主要在MARC145细胞质中表达。研究结果为体外研究猪APOBEC3F基因在抗猪蓝耳病中的作用奠定了基础。

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