文献类型： 中文期刊
作者： 霍惠玲 1 ; 李永清 2 ; 赵燕岭 1 ; 张莉 2 ; 章振华 2 ;
作者机构： 1.河北省兽药监察所
2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所
关键词： 禽流感病毒NS1抗原;重组抗原;纯化
期刊名称： 生物技术通讯
ISSN： 1009-0002
年卷期： 2007 年 18 卷 05 期
页码： 774-777
摘要： 目的:摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NS1抗原的方法,得到高纯度的重组蛋白。方法:将重组质粒pET32a-NS1转染大肠杆菌BL21(DE3)后获得表达,分别以尿素变性、复性,Ni-NTA His.Bind Resin亲和,以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)洗涤溶解等3种纯化方法从表达产物包涵体中分离纯化NS1蛋白,并进行比较研究。结果:原核表达得到相对分子质量约45000的目的蛋白;3种纯化方法均能分离和纯化出NS1重组蛋白,其中尿素纯化的蛋白纯度为50%～60%,Ni-NTAHis.Bind Resin亲和纯化的蛋白纯度为80%～90%,DOC-SKL纯化的蛋白纯度达95%以上;Western blot检测表明,复性后的纯化蛋白具有良好的生物学活性。结论:应用十二烷基肌氨酸钠洗涤纯化是最佳的纯化NS1蛋白的方法,所获得的蛋白可作为包被ELISA的抗原。
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