文献类型： 中文期刊

作者： 戴远兴 ¹ ; 郭留明 ² ; 何婧 ¹ ; 沈峥嵘 ¹ ; 耿艳飞 ² ; 吕明芳 ² ; 袁正杰 ² ; 李静 ² ; 张恒木 ² ;

作者机构： 1.浙江师范大学生命科学学院

2.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

关键词： 中国小麦花叶病毒;富含半胱氨酸蛋白;原核表达;蛋白质纯化;多克隆抗体

期刊名称： 浙江大学学报(农业与生命科学版)

ISSN：

年卷期： 2023 年 005 期

页码： 677-686

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus, CWMV）是小麦花叶病的重要病原体之一，长期威胁小麦的产量和品质；CWMV富含半胱氨酸蛋白（cysteine-rich protein, CRP）在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制，本研究采用反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区，将其克隆至原核表达载体pET-32a上，并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达；通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白，并用作抗原免疫新西兰白兔，制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）和斑点ELISA分析结果显示：纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性，而且效价高达1∶4 096 000，是未纯化抗体效价的4倍；该抗体能识别0.5 ng抗原，显示出较高的灵敏度；在1∶120 000稀释条件下，该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述，本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断，还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析，为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。