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3种水产病原菌简型基因芯片检测技术的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 李晨 1 ; 黄倢 1 ; 谢国驷 1 ; 赵培 1 ; 王秀华 1 ;

作者机构： 1.农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室

关键词： 基因芯片;水产病原菌;检测

期刊名称： 中国海洋大学学报(自然科学版)

ISSN： 1672-5174

年卷期： 2011 年 41 卷 03 期

页码： 37-42

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾白斑病综合征病毒(WSSV)variable region的PCR荧光标记产物作为表面化学质控。通过已构建和优化的多重PCR反应条件,获得了3个目的基因的PCR产物;经过芯片制作过程的优化,将探针以终浓度20μmol/L溶于50%DMSO,在室温、相对湿度45%的条件下点印于醛基基片表面。扩增的PCR产物与杂交液混合后,在42℃杂交2 h就可检测到理想的杂交信号。芯片的灵敏度试验结果表明,可以检测到的3种水产病原菌的最低模板DNA为:鳗弧菌3×102拷贝、嗜水气单胞菌5×103拷贝、迟缓爱德华氏菌6×101拷贝。该芯片可成功应用于患病大菱鲆内脏的细菌分离物的鉴定。

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