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采用正交设计法优化梨SSR-PCR体系

文献类型： 中文期刊

作者： 毕红园 1 ; 王长彪 2 ; 段永红 3 ; 郭黄萍 4 ; 孙毅 2 ;

作者机构： 1.山西大学生物工程学院

2.山西省农业科学院生物技术研究中心

3.山西农业大学农学院

4.山西省农业科学院果树研究所

关键词： 梨;SSR;正交设计;PCR

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2013 年 005 期

页码： 111-115

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立适宜梨树SSR-PCR的反应体系和扩增程序,采用正交设计L16(45)对影响梨树SSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,PCR结果用DPS数据处理软件分析,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适用于梨树的SSR反应体系.在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为50.0 ng,TaqDNA聚合酶的用量为1.4 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.1 mmol/L,引物的浓度为0.5μmol/L.扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性1 min,57℃(依引物不同而改变)退火45 s,72℃1 min,35个循环;72℃延伸10 min.4℃保存.选用24个梨品种对该体系进行稳定性验证,结果证明该体系可用于梨树SSR标记的研究.

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