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实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张铃铃 1 ; 任艳 2 ; 石存斌 2 ; 吴淑勤 2 ;

作者机构： 1.大连水产学院

2.中国水产科学研究院

关键词： 剑尾鱼;IgM基因;实时荧光定量PCR

期刊名称： 大连水产学院学报

ISSN： 1000-9957

年卷期： 2010 年 25 卷 02 期

页码： 172-177

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明:构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7~21和8~25,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43℃、86.09℃,表明扩增产物特异性非常好。本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定。

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