文献类型： 中文期刊

作者： 张燕 ¹ ; 胡波 ¹ ; 宋艳华 ¹ ; 范志宇 ¹ ; 魏后军 ¹ ; 姜平 ² ; 王芳 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院

2.南京农业大学

关键词： 兔出血症病毒;VP60;双串联OVA T细胞表位;病毒样颗粒

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2014 年 29 卷 01 期

页码： 59-65

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,构建VP60携带双串联OVA T细胞表位(Ovalbumin,卵清蛋白第257~264位氨基酸)的嵌合蛋白,研究外源基因对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体对外源基因长度的耐受性。运用基因克隆和重组技术,通过2次SOE法(Splicing by overlap extension,重叠延伸剪接术),将双串联OVA T细胞表位(257~264位氨基酸)的基因序列取代VP60第302~309位氨基酸的基因序列,得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,命名为DC。经IFA、SDS-PAGE、Western Blot、RT-PCR方法鉴定嵌合蛋白的表达,并通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力。嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可自聚形成病毒样颗粒。携带双串联外源表位的嵌合VP60蛋白得到有效表达,并可形成VLPs。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成、结构功能的研究奠定基础,同时扩展了VP60作为载体可携带的外源基因耐受性的研究资料。