文献类型： 中文期刊
作者： 王晶宇 1 ; 欧阳伟 1 ; 钱晶 1 ; 王晓丽 1 ; 夏兴霞 1 ; 诸玉梅 1 ; 毕振威 1 ; 王永山 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室
关键词： 犬干扰素α2;犬血清白蛋白;昆虫细胞表达;抗病毒活性
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2019 年 010 期
页码： 2113-2118
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物活性的犬白蛋白-犬干扰素α2(albumin-CaIFN-α2).将蜂素信号肽(HBM)、犬血清白蛋白(Alb)与犬干扰素α2的融合基因经密码子优化后,连接至转移载体pFastBac1中,获得了重组pFastBac1-HBM-Alb-CaIFN-α2,将重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经过三次蓝白斑筛选纯化,得到的重组穿梭质粒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2转染Sf9细胞,72 h后可观察到明显的细胞病变.用第三代重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2感染Sf9昆虫细胞,感染3 d后,收获昆虫细胞和细胞培养物,间接免疫荧光(IFA)结果显示,重组杆状病毒感染的细胞呈现绿色荧光;Western blot检测结果显示,在约90 ku左右可观察到特异性条带,证实重组Alb-CaIFN-α2能够在昆虫细胞中表达.利用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测重组Alb-CaIFN-α2的抗病毒活性,结果显示重组Alb-CaIFN-α2的活性为1.70*106 U·mL-1,为进一步研究新型犬用干扰素制品奠定了试验基础.
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