文献类型： 中文期刊

作者： 倪艳秀 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 汪伟 ¹ ; 吕立新 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 张雪寒 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪链球菌2型;溶血素成熟蛋白;原核表达;生物学特性;免疫保护性

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 02 期

页码： 335-340

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物(分子量约为7.2×104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20%,表达产物在上清和包涵体中各占一半。将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105HU/mg、4.267×104HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落。纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3%(5/6)。这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础。