文献类型： 中文期刊

作者： 王玲玲 ¹ ; 职爱民 ¹ ; 杨艳艳 ¹ ; 宋春美 ² ; 王坤 ³ ; 柴书军 ¹ ; 侯玉泽 ³ ; 邓瑞广 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室

2.江南大学食品学院

3.河南科技大学食品与生物工程学院

关键词： 百菌清;人工抗原;单克隆抗体;免疫学特性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 07 期

页码： 1509-1515

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】制备高灵敏、高特异性的百菌清(CTN)单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】将CTN进行化学修饰后引入羟基活性基团,合成具有半抗原结构特征的百菌清衍生物(CTN-OH);采用N,N-羰基二咪唑法(CDI)将CTN-OH与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫抗原CTN-BSA和包被抗原CTN-OVA,用紫外分光光度法(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗CTN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗CTN的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】UV和SDS-PAGE鉴定结果显示,CTN-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的3只小鼠效价均达1﹕104以上,其中2号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为93.593 ng.mL-1,融合后筛选出4株杂交瘤细胞株1E8、1F4、2A10和2E2,其细胞上清效价分别为1﹕1.6×103、1﹕6×102、1﹕6×102、1﹕6×102,1E8株腹水效价为1﹕5.12×105,抗CTN单克隆抗体对CTN的IC50为21.6685 ng.mL-1,且具有较好的特异性。【结论】本试验成功合成了CTN人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为CTN免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。