文献类型： 中文期刊

作者： 王蕊 ¹ ; 张改平 ² ; 乔松林 ² ; 刘永晖 ¹ ; 蒋志政 ¹ ; 万博 ² ; 鲍登克 ² ; 王爱萍 ¹ ;

作者机构： 1.郑州大学生物工程系

2.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室

关键词： 猪;实时荧光定量PCR;IFN-β基因;IRF-3基因

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2012 年 41 卷 05 期

页码： 137-140+144

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。