文献类型： 中文期刊
作者： 黄淑君 1 ; 胡兴明 2 ; 于翠 2 ; 邓文 2 ; 叶楚华 2 ;
作者机构： 1.武汉大学生命科学学院
2.武汉大学生命科学学院;湖北省农业科学院经济作物研究所
关键词： 桑树;土壤微生物;基因组DNA;纯度;多样性;PCR;变性梯度凝胶电泳
期刊名称： 蚕业科学
ISSN： 0257-4799
年卷期： 2012 年 38 卷 03 期
页码： 397-403
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了建立桑树根围土壤微生物群落结构的分子生态学试验技术体系,采取不同的细胞裂解方法及DNA沉淀方法直接提取桑树根围土壤微生物总DNA,并以采用试剂盒提取的桑树根围土壤微生物总DNA为参照,筛选出一种能有效提取高纯度、多样性土壤微生物总DNA的方法:以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(SDS)为裂解液,经反复冻融裂解细胞,在DNA提取液中添加聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)、牛血清蛋白(BSA)、CaCl2去除腐殖酸,并结合聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀和纯化DNA。该方法简便、快速,获得的桑树根围土壤微生物基因组DNA分子长度在23 kb以上,土壤鲜样的微生物DNA产率为11.2μg/g,且纯度较高,D(260 nm)/D(230 nm)=1.42,D(260 nm)/D(280 nm)=1.37,可直接用于PCR扩增及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。
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