文献类型： 中文期刊
作者： 唐思静 1 ; 刘惠莉 1 ; 马勋 2 ; 赵艳敏 1 ;
作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所
2.石河子大学动物科技学院
关键词： 大肠杆菌不耐热肠毒素;免疫原性;ADP-核酸转移酶
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2012 年 34 卷 09 期
页码： 697-701
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。
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