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江苏省葫芦科作物6种病毒的多重RT-PCR方法及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 任春梅 1 ; 程兆榜 1 ; 杨柳 1 ; 缪倩 1 ; 周益军 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院植物保护研究所

关键词： 葫芦科作物;病毒;多重RT-PCR

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2015 年 04 期

页码： 756-763

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 江苏省葫芦科作物上的病毒主要有小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)、烟草花叶病毒(TMV)和番木瓜环斑病毒(PRSV),通常发生复合侵染。基于Gen Bank中这6种病毒的核苷酸序列保守区设计特异性引物,在单重RT-PCR技术的基础上,通过对影响2种多重RT-PCR扩增的DNA聚合酶浓度、d NTPs及镁离子浓度、退火温度、延伸时间、循环次数等因素进行优化,对检测灵敏度进行测定,建立了2种PCR反应同时检测葫芦科作物上6种病毒的多重RT-PCR方法。结果显示:2种多重RT-PCR体系均能同时扩增出各自特异性片段,测序分析结果表明序列同源性在97%以上;优化的2种多重RTPC体系检测灵敏度为总RNA稀释102~103倍,应用于江苏省210份样品的检测结果与单重RT-PCR一致,体现了检测的可靠性;检测结果表明近年来江苏省葫芦科作物以种子传播的ZYMV和CGMMV侵染为主,病毒的复合侵染率达75.24%。

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