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调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析

文献类型: 中文期刊

作者: 张冬杰 1 ; 刘洋 2 ; 汪亮 1 ; 李忠秋 1 ; 刘娣 1 ;

作者机构: 1.黑龙江省农业科学院畜牧研究所

2.东北农业大学动物科学技术学院

关键词: ZBED6基因;启动子;荧光素酶活性;重叠PCR;民猪

期刊名称: 中国畜牧杂志

ISSN: 0258-7033

年卷期: 2019 年 55 卷 007 期

页码: 76-81

收录情况: 北大核心

摘要: ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长.为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性.结果表明:ZBED6基因启动子区-2053~-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808~-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显.据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点.

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