文献类型： 中文期刊

作者： 唐思静 ¹ ; 姜云 ² ; 吕转平 ¹ ; 刘惠莉 ³ ; 马勋 ⁴ ; 赵艳敏 ³ ;

作者机构： 1.新疆巴音郭楞职业技术学院

2.新疆兵团第二师畜牧兽医工作站

3.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

4.石河子大学动物科技学院

关键词： 大肠埃希菌不耐热肠毒素;免疫原性;ADP-核酸转移酶

期刊名称： 西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2014 年 23 卷 09 期

页码： 8-13

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK63/G192基因片段,IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡。结果表明:制备的突变体LTK63/G192的基因片段经酶切和测序发现,所构建的表达载体pLTK63/G192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换;经SDS-PAGE电泳检测,野生型LT及双突变体均表达出约33.0ku和13.0ku的两条蛋白带,与LTA、LTB亚基分子质量相吻合;经Western bolt检测,两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应;双突变蛋白的酶活性和毒性与野生型LT相比酶活性和毒性都有所降低;突变体LTK63/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高抗新城疫病毒的IgG和IgA。说明LTK63/G192是一个良好的免疫佐剂。