文献类型： 中文期刊

作者： 黄妙容 ¹ ; 阳建辉 ² ; 刘德武 ¹ ; 黄晓灵 ² ; 蔡更元 ³ ;

作者机构： 1.华南农业大学动物科学学院

2.岳阳职业技术学院

3.广东省农业科学院畜牧研究所

关键词： 黑曲霉;β-葡萄糖苷酶BGL1;克隆表达;CHO细胞;酶活测定

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2012 年 20 卷 12 期

页码： 1449-1456

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一,被认为是纤维素糖化的限速酶。本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1),并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达分析。以GenBank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板,设计特异性引物,从黑曲霉(Asperjillus niger)基因组DNA中扩增目的片段,通过SOE-PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连,成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1,利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物CHO细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,最后通过DNS(dinitrosalicylic acid)法测定表达产物酶学活性。PCR扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91%,预测的蛋白氨基酸序列相似性为99%。RT-PCR和Western blot检测证明,外源基因bgl1在CHO细胞中得到表达;分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74U/mL,说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性。本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物CHO细胞中进行表达,为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料。