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槟榔植原体膜蛋白基因的克隆及其抗血清制备

文献类型： 中文期刊

作者： 杨文君 1 ; 余乃通 2 ; 张雨良 2 ; 王健华 2 ; 刘志昕 2 ;

作者机构： 1.雅安职业技术学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 槟榔植原体;膜蛋白基因;原核表达;抗血清制备

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2014 年 35 卷 11 期

页码： 2243-2248

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据实验室测得的槟榔植原体膜蛋白基因(Ac Pmp)序列设计1对特异引物mp-FP/mp-RP,以病样槟榔总DNA为模板扩增该Ac Pmp的编码区并连接到p MD19T simple中间载体。将测序正确的阳性菌提取质粒p MD19T-Ac Pmp,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后回收Ac Pmp片段,然后以正确的编码框连接到原核表达载体p ET32a(+),转化Escherichia coli BL21感受态细胞。含有p ET32a-Ac Pmp的BL21表达菌经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,在30℃,0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,可产生部分可溶性的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和层析柱法进行纯化并获得高纯度的可溶性融合蛋白。将纯化后的融合蛋白多次免疫家兔,取其抗血清,以融合蛋白(1∶10 000稀释)作抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。Western Blot杂交结果表明槟榔植原体膜蛋白抗血清能与融合蛋白特异性结合。

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