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感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价

文献类型： 中文期刊

作者： 谭老喜 1 ; 张雨良 2 ; 周朋 2 ; 章绍延 2 ; 王健华 2 ; 张秀春 2 ; 刘志昕 2 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室;海南大学环境与植物保护学院

关键词： 香蕉束顶病毒;香蕉叶片;酵母双杂交cDNA文库

期刊名称： 植物研究

ISSN： 1673-5102

年卷期： 2013 年 33 卷 06 期

页码： 75-79

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制,本文报道利用Make Your Own"Mate&PlateTM"Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA,采用SMART法反转录合成双链cDNA,经SfiI酶切并去除短片段之后,与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接,利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中,获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2.0×106的初级文库,检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700~2 000 bp,文库重组率为87.5%。结果表明,该文库质量较好,可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验,本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。

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[1]改良CTAB法提取高质量香蕉叶片总RNA. 淦国英,漆艳香,蒲金基,张欣,谢艺贤. 2009

[2]一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法. 柴娟,冯仁军,史后蕊,任梦云,王静毅,张银东. 2014

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[6]巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建及评价. 陈洪举,张浩,高乐,何鹏,韦家少. 2017

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[8]香蕉束顶病毒两个DNA-U3组分的鉴定及重组分析. 周朋,余乃通,章绍延,王健华,Xiong Zhongguo. 2014

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[11]香蕉两种主要病毒多重PCR检测方法的建立. 彭军,王国芬,黄俊生,代鹏,谢玉萍,李伟东. 2006

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[13]香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备. 余乃通,冯团成,王建华,刘志昕. 2010

[14]香蕉束顶病毒海口分离物Rb蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗血清制备. 冯团诚,余乃通,刘志昕. 2010

[15]香蕉束顶病毒海口分离物基因组的克隆及序列分析. 冯团诚,王健华,刘志昕. 2010

[16]香蕉束顶病毒海口分离物NSP基因的原核表达. 冯团诚,王健华,刘志昕. 2009

[17]香蕉束顶病毒海南分离物DNA2编码区的克隆及抗血清的制备. 赵焕阁,牛胜鸟,彭存智,刘志昕. 2008

[18]香蕉束顶病毒海口分离物Rep基因的克隆、原核表达、抗血清制备及检测. 余乃通,冯团诚,王健华,张雨良,刘志昕. 2011

[19]香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证. 王祥,张秀春,余乃通,梁洁,周朋,刘志昕. 2015

[20]香蕉束顶病毒cp和mp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证. 王祥,张秀春,余乃通,周朋,梁洁,刘志昕. 2014

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