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慢病毒介导的CRISPR/Cas9靶向ACTB基因sgRNA的设计及活性验证

文献类型： 中文期刊

作者： 朱新宇 1 ; 何燕华 2 ; 李晓娇 1 ; 刘子敬 2 ; 张晓爱 3 ; 罗成龙 2 ;

作者机构： 1.仲恺农业工程学院动物科技学院

2.广东省农业科学院动物科学研究所/猪禽种业全国重点实验室/广东省畜禽育种与营养研究重点实验室

3.广东省农业科学院农业生物基因研究中心

关键词： 鸡;切割活性;sgRNA;ACTB基因

期刊名称： 广东畜牧兽医科技

ISSN： 1005-8567

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 23-29,36

摘要： 该实验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对鸡β-肌动蛋白（β-actin,ACTB）基因外显子2上设计的4条sgRNA进行切割活性验证，为在ACTB基因位点定点敲入外源基因提供工作基础。本实验通过网站设计四条特异性识别ACTB基因的sgRNA序列，构建到带有表达绿色荧光蛋白的慢病毒载体上，在293T细胞上包装慢病毒，然后将慢病毒液感染稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系（DF-1）验证sgRNA的切割活性。通过细胞荧光表达分析、T7E1内切酶和体外活性检测，鉴定出有切割活性的3条sgRNA，为后续在DF-1细胞上进行功能验证、基因定点敲入奠定了实验基础，同时为后续在鸡这一物种中进行基因编辑提供了研究材料。

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