文献类型： 中文期刊
作者： 黄新 1 ; 王新华 1 ; 钟发刚 1 ;
作者机构： 1.新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室
关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E2基因;克隆;抗原表位;表达
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2009 年 39 卷 04 期
页码： 321-326
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。
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