文献类型： 中文期刊
作者： 郑其升 1 ; 李鹏 1 ; 曹瑞兵 1 ; 候继波 2 ; 陈溥言 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院
2.江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;改良型痘苗病毒安卡拉株;修饰的GP5与M蛋白;共表达
期刊名称： 生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2008 年 24 卷 05 期
页码： 65-72
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)修饰的ORF5(MORF5)与ORF6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vaccinia virus ankara,MVA)转移载体pLR-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体pLR-MORF5/ORF6。经脂质体介导,将构建好的pLR-MORF5/ORF6转染已感染亲本MVA2h的BHK-21细胞单层,用药物选择性培养基(MXHAT)在24孔板上进行连续筛选纯化,得到带有筛选标记的重组病毒rMVAgpt-MGP5/M。将rMVAgpt-MGP5/M感染表达Cre重组酶的BHK-21细胞(BHK-Cre),获得删除筛选标记的重组病毒rMVA-MGP5/M。PCR证明MORF5与ORF6成功插入MVA基因组中;Western blotting与间接免疫荧光证明重组病毒能表达MGP5与M蛋白;重组病毒的生长特性表明与亲本MVA出现病变的时间及病毒滴度基本一致。结果表明,本研究成功构建了共表达PRRSVMGP5与M蛋白的重组MVA,并且表达产物具有免疫原性;外源基因的插入不影响MVA复制,具较好的稳定性,从而为PRRSV新型基因工程疫苗的研制奠定了良好的基础。
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