文献类型： 中文期刊
作者： 唐永凯 1 ; 李建林 1 ; 李红霞 1 ; 俞菊华 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
关键词： 建鲤;Leptin;载体;原核表达
期刊名称： 动物学杂志
ISSN： 0250-3263
年卷期： 2014 年 49 卷 01 期
页码： 53-58
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 使用SignalP-4.0软件预测信号肽剪切位点,设计引物扩增建鲤(Cyprinus carpio var.jian)leptin基因(jlLEP-A1,jlLEP-B)不含信号肽的ORF区域。扩增产物分别连接到pET-32a(+)和pGex-4T-1原核表达载体,构建重组质粒,测序验证插入位点的正确性。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白pET-32a(+)/jlLEP-A1,pET-32a(+)/jlLEP-B和pGex-4T-1/jlLEP-A1,pGex-4T-1/jlLEP-B。结果表明,在37℃和1 mmol/L IPTG的条件下诱导5 h,重组蛋白表达量最大。SDS-PAGE电泳显示重组蛋白主要以可溶蛋白形式存在。这一结果为后续的建鲤leptin基因功能研究奠定了基础。
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