文献类型： 中文期刊
作者： 段永红 1 ; 渠云芳 1 ; 王长彪 2 ; 毕红园 2 ; 王玉庆 1 ; 孙毅 2 ; 杨武德 1 ;
作者机构： 1.山西农业大学农学院
2.山西省农业科学院生物技术研究中心
关键词： 苦参;SSR;优化;正交设计
期刊名称： 中国农业大学学报
ISSN： 1007-4333
年卷期： 2014 年 19 卷 05 期
页码： 101-106
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为有效利用SSR-PCR技术对药用植物苦参进行遗传多样性分析,采用正交设计L16(45)对影响苦参SSRPCR体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,PCR结果用DPS数据处理软件分析,筛选出各因素的最佳水平,建立适宜苦参SSR-PCR的反应体系和扩增程序,并选用内蒙古苦参对该体系进行稳定性验证。结果表明:在10μL的苦参SSR-PCR体系中,模板DNA的用量为20.0ng,Taq DNA聚合酶的用量为0.2~0.6U,Mg2+的浓度为2.5mmol/L,dNTPs浓度为0.1mmol/L,引物的浓度为0.6μmol/L。扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性1min,56℃退火45s,72℃1min,35个循环;72℃延伸10min。4℃保存。选用12份苦参DNA对该体系进行稳定性验证,该体系具有较高的扩增稳定性,可用于药用植物苦参SSR标记的研究。
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