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拟南芥WUS基因的克隆及植物表达载体的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 毕政鸿 1 ; 李哲 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室

关键词： AtWUS基因;EGFP基因;融合基因;重叠延伸PCR;橡胶树

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2013 年 18 期

页码： 119-126

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究AtWUS基因在橡胶树胚性易碎愈伤组织中的表达对体细胞胚发生的生物学作用,用构建的根癌农杆菌EHA105(携带pCAMBIA2301-35S-AtWUS)对橡胶树胚性易碎愈伤组织进行转化。根据已报道的AtWUS序列设计特异引物,进行RT-PCR和序列分析,同时用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称)构建AtWUS-EGFP融合基因。结果表明:与GenBank上EGFP基因和拟南芥AtWUS序列同源性为100%,分别构建了pCAMBIA2301-35S-AtWUS(含有GUS和NPTII基因)和pER8-AtWUS-EGFP(含有HPTII基因)载体,采用电击转化法转进根癌农杆菌EHA105中。最后,通过GUS检测法鉴定了pCAMBIA2301-35S-AtWUS已经整合到橡胶树中。本研究分别成功构建了组成型植物表达载体pCAMBIA2301-35S-AtWUS和诱导型植物表达载体pER8-AtWUS-EGFP,为橡胶树遗传转化的研究奠定了基础。

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