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牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立

文献类型： 中文期刊

作者： 钟发刚 1 ; 黄新 1 ; 王新华 1 ; 李娜 1 ;

作者机构： 1.新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E2重组蛋白;ELISA

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2010 年 47 卷 04 期

页码： 761-764

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法。【方法】重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达;Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度。【结果】重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7%,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测,检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55%。【结论】以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础。

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