文献类型： 中文期刊

作者： 梁望旺 ¹ ; 周丹娜 ¹ ; 田永祥 ¹ ; 伍锐 ¹ ; 杨克礼 ¹ ; 刘泽文 ¹ ; 段正赢 ¹ ; 邓均华 ¹ ; 郭锐 ¹ ; 袁秋云 ¹ ; 徐涤平 ¹ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 猪α干扰素;毕赤酵母;分泌表达

期刊名称： 湖北农业科学

ISSN： 0439-8114

年卷期： 2010 年 49 卷 11 期

页码： 2665-2668

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因,并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母(Pichia pastoris)-大肠杆菌(Escherichia coli)穿梭质粒pPIC9K载体中,构建分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFN-α。将SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母GS115株(组氨酸缺陷型),使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以G418抗性梯度法筛选多拷贝重组子。该多拷贝菌株经1%甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明,猪α干扰素在毕赤酵母中成功地获得了分泌表达,并具有免疫活性,表达产物约为19kD,这为进一步研究猪α干扰素的功能奠定了基础。