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苦瓜Bryodin Ⅱ-like RIP生物信息学分析及原核表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 王煜琪 1 ; 姚春鹏 2 ; 张晓爱 3 ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.广东省农业科学院蔬菜研究所广东省蔬菜新技术研究重点实验室

3.广东省农业科学院农业生物基因研究中心广东省农作物种质资源保存与利用重点实验室

关键词： 苦瓜;核糖体失活蛋白;生物信息学分析;原核表达载体

期刊名称： 黑龙江科学

ISSN： 1674-8646

年卷期： 2025 年 16 卷 018 期

页码： 10-14

摘要： 为构建苦瓜BryodinⅡ-likeRIP原核表达载体并进行生物信息学分析，通过CugenDB数据库的苦瓜(OHB3-1)v2基因组获得目的基因CDS序列，结合NCBI数据库的氨基酸序列，利用生物信息学软件预测其结构与功能。以苦瓜全基因组cDNA为模板，PCR扩增目的基因后，通过SacⅠ和SalⅠ双酶切，经T4连接酶连接后转入大肠杆菌DH5α感受态。结果显示，保守结构域分析可知该蛋白属于Ⅰ型核糖体失活蛋白，与α-苦瓜素、β-苦瓜素、MAP30和苦瓜凝集素等典型苦瓜RIPs的核苷酸序列同源性为48.6%～58.5%(氨基酸序列同源性为30.8%～45.5%),成功扩增出与预期大小相符的目的基因，重组质粒经菌落PCR及测序验证苦瓜BryodinⅡ-likeRIP与原核表达载体pET-28a(+)正确连接，生物信息学分析该蛋白具备RIP典型功能域，属于RIP家族，并成功构建苦瓜BryodinⅡ-likeRIP原核表达载体。

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