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多重RT-PCR快速检测禽流感病毒的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陈思怀 1 ; 乔宪凤 2 ; 华文君 2 ; 郑新民 2 ; 魏庆信 2 ; 张涌 1 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学生物工程研究所

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 禽流感;反转录聚合酶链式反应;诊断

期刊名称： 湖北农业科学

ISSN： 0439-8114

年卷期： 2006 年 45 卷 01 期

页码： 20-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法。应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析。也对NDVI、BVI、BDV尿囊液以及3种亚型AIV尿囊液的2倍系列稀释样品进行检测。结果表明,3种亚型AIV尿囊液均出现2条特异性条带,经测序确证为目的扩增片段,BLAST的同源性初步判断3种AIV的亚型为H5N1、H6N2、H9N20对NDVI、BVI、BDV的RNA扩增未见2条目的条带,判断为阴性,说明该法特异性强;能对3种亚型AIV尿囊液64～128倍稀释的样品检测出AIV,表明其灵敏度高。该检测法检测的整个过程仅需4h,实现了AIV的快速检测。

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