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禽呼肠病毒σC基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 董嘉文 1 ; 孙敏华 1 ; 李林林 1 ; 胡奇林 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： 禽呼肠病毒;σC基因;克隆与表达;酶联免疫吸附试验

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2012 年 33 卷 08 期

页码： 11-16

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将RT-PCR扩增得到的禽呼肠病毒(ARV)S1133毒株的σC基因克隆至pMD-18T-Simple载体,经酶切及测序鉴定,证明该基因片段为ARVσC基因。将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表达载体pET32a-σC。该重组质粒在大肠埃希菌BL21中经1.0mmol/L IPTG诱导5h得到最佳表达。pET32a-σC蛋白的分子质量为55ku,Western blot分析表明,该重组蛋白能与ARV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。将纯化好的ARVσC蛋白作为包被抗原,确定了该方法的抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清的最适稀释度为1∶400。用建立的ELISA方法检测接种过ARV疫苗的65份临床血清样品,测得44份为阳性,阳性率为67.7%;未接种ARV疫苗的30份血清样品检测结果均为阴性。

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